第452章 难道不允许我偷偷努力，然后惊艳所有人吗？
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陆时羡闻言一笑，透露出一丝神秘的气息：“说出来就没意思了，你们可以猜猜看。”
几人你看看我，我看看你，眼中都是好奇和探究。
对他话里的真实性倒是一点没有怀疑。
因为他们对陆时羡的信任，早已经在长时间的相处中得到了多次验证。
时间紧急，任务繁重。
几个人心里都清楚接下来的时间可能不会轻松了。
但也都做好了苦战得心理准备。
做科研不耐得了寂寞是不行的。
不过陆时羡发现一向显得理智的梅林此时居然显得有些亢奋。
他好笑地摇摇头，忽然想到一句话：“如果没有旺盛的好奇心和纯粹的求知欲为动力，就不可能产生那些对人类和社会具有巨大价值的发明创造。”
在这个角度上，他认为梅林和他是一路人。
没有多余的寒暄，也没有多余的解释。
四人默契地回到实验室。
陆时羡站在操作台前直入主题。
“接下来，可能大家要辛苦一点，将所有测序的准备工作做好，然后所有的测序流程由我来操作。”
“梅林、瑟琳和鲍勃你们分别负责DNA提取、文库构建和引物连接的预处理操作。”
“这个工作结束之后，你们可以看我的操作，有什么不懂的都可以问我。”
闻言，三人皆是点头，没有异议。
这个安排和他们预想的差不太多。
只不过就是测序仪只有一台，又只有陆时羡一个人操作。
相较于预处理，陆时羡的工作就显得更繁复。
三代测序技术其实也就是单分子测序技术，它能够直接读取单DNA分子的序列信息，从而规避掉PCR扩增和文库扩增带来的风险。
但没有完美的技术，这项技术区别于高通量测序技术的缺点是测序信息量大且非常复杂，在测序过程中对精力的消耗是很大的。
三人仿佛已经看见陆时羡即将爆肝的样子，心中都是对他发际线的怜悯。
但他们对陆时羡的想法一无所知。
接下来，几人都陷入了紧张而有序的忙碌之中。
预处理看似只是测序的基础，但也不是随便来个人就能做的。
他们这台测序仪运用的是SMRT测序技术，它是利用DNA多聚酶在放射线观测下合成DNA，从而观察到DNA的添加情况，以此得到DNA的序列信息。
文库制备是预处理工作中最复杂的一环，需要对基因组的DNA进行片段化的末端修复。
这个操作类似于进行最精密的手术，需要将发夹式的接头连接到双链DNA分子两端，然后形成一个封闭的圆圈。ωωw..net
再将引物和聚合酶退火到接头上，最后就能形成一个哑铃状的待测序文库。
光是这个流程就耽误了三四天的时间。
三个人经过现学，然后依次进行了操作。
最后的结果让陆时羡很是意外。
在这种精细实验操作上，鲍勃的表现居然比作为女生的瑟琳还要好。
综合制备时间和效果，他得到的文库经过查验之后标准程度比较高。
虽然和陆时羡亲手制备的还比不了，但用来进行测序已经是基本满足要求了。
看着几人都是诧异地望着自己，鲍勃虽然也很意外，但在脸上毫无显现，然后骄傲地抬起头。
“看什么？”
“难道不允许我偷偷努力，然后惊艳所有人吗？”
不过，都是朝夕相处的队友，彼此什么习惯和水平都清楚。
估计是瞎猫碰上死耗子，但梅林和瑟琳没好意思去打击他。
“我假装信了。”陆时羡嘴上说着，心中还是比较开心的。
一个团队如果一直只靠固定的那么几个人，是不会存在太久的。
一个人的精力和时间是有限的，而探索无边宇宙和世界奥秘的事业却是无限的。
这也就注定单打独斗是走不远的。
有人能够站出来，分担一下他的压力，陆时羡感到有些欣慰。
“很好，那么文库制备这块工作就由鲍勃来负责，梅林你和瑟琳在完成其他步骤之后进行协助就好了。”
接下来的几天，经过不断的磨合。
这个四人小团队才逐渐走入了正轨。
没办法，和陆时羡这种以前熟练掌握过的不一样，在这项技术上，三人几乎是从头开始学习。
而且就这还只是前置准备工作，就几乎花费了一个星期的时间。
“你们之前已经知道在片段化操作中，这个过程是随机的，因此可能会出现平齐的末端，也有可能出现不平的末端，因此要进行末端修复，将产生的所有的3'或5'突出黏性末端转化成平末端。”陆时羡正解答着来自鲍勃的问题，
经过对新技术的不断上手操作，再结合他以前的实验经历，彼此碰撞之下，鲍勃产生了一些疑惑。
他的问题是：“末端修复加A碱基很好理解，是为了产生粘性末端，但进行接头连接全过程都要用到T4DNA聚合酶，让他有些不解。
这个问题比较基础，只能说鲍勃之前没有留意聚合酶的各种作用。
但陆时羡也没不耐烦，认真的回答道：“那是因为T4DNA聚合酶全程都在起作用，它的原理是不仅能够从5'至3'方向催化合成DNA，补平5'突出末端，也具有3'至5'外切酶活性，帮助对3'突出末端进行切平，最后将黏性末端DNA片段转变为平末端DNA。”
紧接着，梅林也贡献了一个问题。
他颇为疑惑地问道：“我们的样本里面含有的RNA中最多的是rRNA，如果直接对最后得到的RNA文库进行测序，那么数据里面可能会存在rRNA的测序数据，这个数据我怕会有一些误差啊？”
陆时羡不断在心中点头。
梅林能想到这一点，足以见到他思维的连贯性。
没办法，这个问题确实问的很关键，几乎决定了测序工作成功与否。
而他之前都没有主动提及这一环，是想着自己亲自上手处理时候在说一下的。
但现在既然有人说到这，提前一下也不是不行。
事实上，梅林的判断还是有些保守了。
陆时羡闻言一笑，透露出一丝神秘的气息：“说出来就没意思了，你们可以猜猜看。”
几人你看看我，我看看你，眼中都是好奇和探究。
对他话里的真实性倒是一点没有怀疑。
因为他们对陆时羡的信任，早已经在长时间的相处中得到了多次验证。
时间紧急，任务繁重。
几个人心里都清楚接下来的时间可能不会轻松了。
但也都做好了苦战得心理准备。
做科研不耐得了寂寞是不行的。
不过陆时羡发现一向显得理智的梅林此时居然显得有些亢奋。
他好笑地摇摇头，忽然想到一句话：“如果没有旺盛的好奇心和纯粹的求知欲为动力，就不可能产生那些对人类和社会具有巨大价值的发明创造。”
在这个角度上，他认为梅林和他是一路人。
没有多余的寒暄，也没有多余的解释。
四人默契地回到实验室。
陆时羡站在操作台前直入主题。
“接下来，可能大家要辛苦一点，将所有测序的准备工作做好，然后所有的测序流程由我来操作。”
“梅林、瑟琳和鲍勃你们分别负责DNA提取、文库构建和引物连接的预处理操作。”
“这个工作结束之后，你们可以看我的操作，有什么不懂的都可以问我。”
闻言，三人皆是点头，没有异议。
这个安排和他们预想的差不太多。
只不过就是测序仪只有一台，又只有陆时羡一个人操作。
相较于预处理，陆时羡的工作就显得更繁复。
三代测序技术其实也就是单分子测序技术，它能够直接读取单DNA分子的序列信息，从而规避掉PCR扩增和文库扩增带来的风险。
但没有完美的技术，这项技术区别于高通量测序技术的缺点是测序信息量大且非常复杂，在测序过程中对精力的消耗是很大的。
三人仿佛已经看见陆时羡即将爆肝的样子，心中都是对他发际线的怜悯。
但他们对陆时羡的想法一无所知。
接下来，几人都陷入了紧张而有序的忙碌之中。
预处理看似只是测序的基础，但也不是随便来个人就能做的。
他们这台测序仪运用的是SMRT测序技术，它是利用DNA多聚酶在放射线观测下合成DNA，从而观察到DNA的添加情况，以此得到DNA的序列信息。
文库制备是预处理工作中最复杂的一环，需要对基因组的DNA进行片段化的末端修复。
这个操作类似于进行最精密的手术，需要将发夹式的接头连接到双链DNA分子两端，然后形成一个封闭的圆圈。ωωw..net
再将引物和聚合酶退火到接头上，最后就能形成一个哑铃状的待测序文库。
光是这个流程就耽误了三四天的时间。
三个人经过现学，然后依次进行了操作。
最后的结果让陆时羡很是意外。
在这种精细实验操作上，鲍勃的表现居然比作为女生的瑟琳还要好。
综合制备时间和效果，他得到的文库经过查验之后标准程度比较高。
虽然和陆时羡亲手制备的还比不了，但用来进行测序已经是基本满足要求了。
看着几人都是诧异地望着自己，鲍勃虽然也很意外，但在脸上毫无显现，然后骄傲地抬起头。
“看什么？”
“难道不允许我偷偷努力，然后惊艳所有人吗？”
不过，都是朝夕相处的队友，彼此什么习惯和水平都清楚。
估计是瞎猫碰上死耗子，但梅林和瑟琳没好意思去打击他。
“我假装信了。”陆时羡嘴上说着，心中还是比较开心的。
一个团队如果一直只靠固定的那么几个人，是不会存在太久的。
一个人的精力和时间是有限的，而探索无边宇宙和世界奥秘的事业却是无限的。
这也就注定单打独斗是走不远的。
有人能够站出来，分担一下他的压力，陆时羡感到有些欣慰。
“很好，那么文库制备这块工作就由鲍勃来负责，梅林你和瑟琳在完成其他步骤之后进行协助就好了。”
接下来的几天，经过不断的磨合。
这个四人小团队才逐渐走入了正轨。
没办法，和陆时羡这种以前熟练掌握过的不一样，在这项技术上，三人几乎是从头开始学习。
而且就这还只是前置准备工作，就几乎花费了一个星期的时间。
“你们之前已经知道在片段化操作中，这个过程是随机的，因此可能会出现平齐的末端，也有可能出现不平的末端，因此要进行末端修复，将产生的所有的3'或5'突出黏性末端转化成平末端。”陆时羡正解答着来自鲍勃的问题，
经过对新技术的不断上手操作，再结合他以前的实验经历，彼此碰撞之下，鲍勃产生了一些疑惑。
他的问题是：“末端修复加A碱基很好理解，是为了产生粘性末端，但进行接头连接全过程都要用到T4DNA聚合酶，让他有些不解。
这个问题比较基础，只能说鲍勃之前没有留意聚合酶的各种作用。
但陆时羡也没不耐烦，认真的回答道：“那是因为T4DNA聚合酶全程都在起作用，它的原理是不仅能够从5'至3'方向催化合成DNA，补平5'突出末端，也具有3'至5'外切酶活性，帮助对3'突出末端进行切平，最后将黏性末端DNA片段转变为平末端DNA。”
紧接着，梅林也贡献了一个问题。
他颇为疑惑地问道：“我们的样本里面含有的RNA中最多的是rRNA，如果直接对最后得到的RNA文库进行测序，那么数据里面可能会存在rRNA的测序数据，这个数据我怕会有一些误差啊？”
陆时羡不断在心中点头。
梅林能想到这一点，足以见到他思维的连贯性。
没办法，这个问题确实问的很关键，几乎决定了测序工作成功与否。
而他之前都没有主动提及这一环，是想着自己亲自上手处理时候在说一下的。
但现在既然有人说到这，提前一下也不是不行。
事实上，梅林的判断还是有些保守了。